糖尿病是21世紀(jì)全球范圍的流行病，糖化血紅蛋白（haemoglobinA1c，HbA1c）達(dá)標(biāo)既是糖尿病患者血糖控制目標(biāo)，又是評(píng)價(jià)血糖管理治療方案的有效指標(biāo)。HbA1c還是世界衛(wèi)生組織（WHO）和許多國(guó)家糖尿病學(xué)會(huì)推薦的糖尿病首選診斷指標(biāo)[1,2]。與傳統(tǒng)的糖尿病診斷指標(biāo)––血糖相比，HbA1c具有生物學(xué)變異性小、不易受血糖波動(dòng)的影響、無(wú)需空腹或特定時(shí)間取血、分析前的不穩(wěn)定性小等特點(diǎn)，是20世紀(jì)90年代中期開(kāi)始在國(guó)際上逐步推廣應(yīng)用的一個(gè)指標(biāo)。

為提高國(guó)內(nèi)HbA1c測(cè)定質(zhì)量，適應(yīng)臨床應(yīng)用的需要，更科學(xué)、合理、有效地運(yùn)用HbA1c并發(fā)揮其作用，有必要在充分參考和吸收國(guó)際理念、共識(shí)以及經(jīng)驗(yàn)的基礎(chǔ)上，根據(jù)國(guó)內(nèi)HbA1c檢測(cè)現(xiàn)狀，制定符合我國(guó)國(guó)情的HbA1c檢測(cè)共識(shí)。衛(wèi)生部臨床檢驗(yàn)中心、北京大學(xué)人民醫(yī)院和國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理總局北京醫(yī)療器械檢驗(yàn)所牽頭組織專(zhuān)家共同起草《糖化血紅蛋白測(cè)定專(zhuān)家共識(shí)》。本共識(shí)在制定過(guò)程中，通過(guò)多種方式廣泛征求臨床糖尿病學(xué)專(zhuān)家、檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)工作者以及各類(lèi)、各級(jí)醫(yī)療機(jī)構(gòu)相關(guān)醫(yī)務(wù)工作者意見(jiàn)后，幾經(jīng)討論、修改，在此呈現(xiàn)給大家以供參考。

鑒于本共識(shí)是參考目前國(guó)內(nèi)、外大量相關(guān)研究并根據(jù)我國(guó)HbA1c檢測(cè)的具體國(guó)情而制定，今后隨著新的共識(shí)理念、研究結(jié)果及更多證據(jù)的出現(xiàn)，應(yīng)適時(shí)修訂本共識(shí)，以適應(yīng)臨床應(yīng)用發(fā)展的需要。

本共識(shí)分4個(gè)部分，包括HbA1c檢測(cè)的干擾因素、方法選擇、方法應(yīng)用及結(jié)果質(zhì)量監(jiān)測(cè)和保證方面的內(nèi)容。

一、HbA1c的定義、表達(dá)、定期檢測(cè)原則及其干擾因素

（一）HbA1c的定義

HbA1c是人體血液中葡萄糖與血紅蛋白β鏈N末端纈氨酸殘基以共價(jià)鍵結(jié)合的穩(wěn)定的化合物，全稱(chēng)為：血紅蛋白β鏈（血液）-N-（1-脫氧果糖-1-基）血紅蛋白β鏈[3]。

（二）HbA1c的表達(dá)

糖基化血紅蛋白（glycatedhemoglobin）是葡萄糖與血紅蛋白的結(jié)合產(chǎn)物，是一類(lèi)化合物的總稱(chēng)。其中HbA1c為主要組成成分，占總糖基化血紅蛋白的60%。HbA1c由葡萄糖的游離醛基與血紅蛋白的β鏈N末端纈氨酸的氨基經(jīng)非酶促結(jié)合反應(yīng)，先形成不穩(wěn)定的醛亞胺（schiff堿），然后經(jīng)過(guò)葡糖胺（amadori）重排，最后形成穩(wěn)定的酮胺化合物，其含量主要取決于血糖濃度及血糖與血紅蛋白的接觸時(shí)間，可以反映測(cè)定前120d的平均血糖水平，HbA1c的個(gè)體內(nèi)生物學(xué)變異小于2.0%[4]。

目前臨床應(yīng)用及實(shí)驗(yàn)室定量測(cè)定的是HbA1c組分或"相當(dāng)于HbA1c"組分，即采用HbA1c占總血紅蛋白的比例（％）來(lái)表示HbA1c的濃度。為避免HbA1c與總糖基化血紅蛋白的混淆，國(guó)際專(zhuān)家組織達(dá)成共識(shí)[5]。

建議1糖化血紅蛋白的術(shù)語(yǔ)應(yīng)為HbA1c，在指南或教育資料中亦可以使用縮寫(xiě)A1C。

（三）HbA1c的定期檢測(cè)原則

一般情況下，HbA1c的控制目標(biāo)應(yīng)小于7%。治療未能達(dá)標(biāo)不應(yīng)視為治療失敗，因?yàn)榭刂浦笜?biāo)的任何改善對(duì)患者都將有益，將會(huì)降低相關(guān)危險(xiǎn)因素引發(fā)并發(fā)癥的風(fēng)險(xiǎn)，如HbA1c水平的降低與糖尿病患者微血管并發(fā)癥及神經(jīng)病變的減少密切相關(guān)。2型糖尿病患者在不發(fā)生低血糖的情況下，如果病程較短、預(yù)期壽命較長(zhǎng)、沒(méi)有并發(fā)癥、未合并心血管疾病，則應(yīng)使其HbA1c水平盡可能接近正常。而兒童、老年人、有頻發(fā)低血糖傾向、預(yù)期壽命較短以及合并心血管疾病或嚴(yán)重的急、慢性疾病等患者，HbA1c的控制目標(biāo)宜適當(dāng)放寬。

對(duì)于患有貧血和血紅蛋白異常疾病的患者，HbA1c的檢測(cè)結(jié)果是不可靠的[6]。

建議2在治療之初每3個(gè)月檢測(cè)1次，一旦達(dá)到治療目標(biāo)可每3~6個(gè)月檢測(cè)一次。

（四）HbA1c檢測(cè)的干擾因素

HbA1c是紅細(xì)胞中血紅蛋白與葡萄糖的結(jié)合產(chǎn)物，因此，任何引起血紅蛋白數(shù)量與質(zhì)量變化的因素都會(huì)干擾HbA1c的測(cè)定，對(duì)其結(jié)果產(chǎn)生影響[7,8,9]。干擾因素包括：血紅蛋白病、衍生血紅蛋白、紅細(xì)胞生存周期的異常及藥物等。有些干擾因素及其干擾程度取決于所采用的測(cè)定方法（方法學(xué)特異），而有些干擾無(wú)論采用何種方法都無(wú)法克服（非方法學(xué)特異）[10]。

1．非方法學(xué)特異的干擾因素：

紅細(xì)胞生存周期的異常：任何可能縮短紅細(xì)胞壽命的因素如：溶血性貧血、大量失血、脾腫大、風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、慢性肝臟疾病等可使HbA1c的測(cè)定結(jié)果假性降低。任何可以引起紅細(xì)胞平均壽命增加的因素如：脾切除、再生障礙性貧血、缺乏維生素B12、腎損傷等可使HbA1c的測(cè)定結(jié)果假性升高。

血紅蛋白?。耗壳霸S多測(cè)定方法可以在一定程度上克服大部分常見(jiàn)的變異血紅蛋白的干擾，但仍有特殊的變異血紅蛋白干擾測(cè)定結(jié)果。

某些藥物如：維生素C和E可以抑制血紅蛋白的糖基化，長(zhǎng)期大劑量服用可以使HbA1c測(cè)定結(jié)果假性降低。長(zhǎng)期大劑量服用乙酰水楊酸鹽、嗜酒會(huì)導(dǎo)致血紅蛋白乙?；?，使HbA1c測(cè)定結(jié)果假性升高。長(zhǎng)期使用慢性麻醉劑、羥基脲，可以使HbA1c測(cè)定結(jié)果假性升高。

婦女妊娠時(shí)由于血容量的增加，使HbA1c測(cè)定結(jié)果假性降低。

對(duì)進(jìn)展迅速的1型糖尿病，HbA1c不能真實(shí)反映急性血糖變化情況，測(cè)定結(jié)果假性降低。

嚴(yán)重的黃疸可能使測(cè)定結(jié)果假性升高，高脂血癥可能使測(cè)定結(jié)果假性降低。

其他因素如：種族和年齡，有報(bào)道：某些族群的HbA1c水平明顯偏高[11]；年齡每增加10歲，HbA1c增加0.1%[12]。

2．方法學(xué)特異的干擾因素：

通常情況下，變異血紅蛋白及衍生血紅蛋白主要干擾基于糖化與非糖化血紅蛋白所帶電荷不同的離子交換色譜法，包括離子交換高效液相色譜法（highperformanceliquidchromatography,HPLC）；理論上變異血紅蛋白對(duì)免疫法不干擾，而實(shí)際上對(duì)某些免疫法有干擾存在[13,14]。

有的測(cè)定方法在HbA1c參考區(qū)間（范圍）內(nèi)不受變異血紅蛋白及衍生血紅蛋白的干擾，但在測(cè)定高值患者樣本時(shí)，隨著HbA1c值的增高，干擾也會(huì)增加，需仔細(xì)觀察測(cè)定結(jié)果圖譜。

變異血紅蛋白HbS、HbC、HbD和HbE等可影響HbA1c測(cè)定結(jié)果，影響的程度取決于所采用的測(cè)定方法。

腎病患者由于血紅蛋白的甲酰化，使測(cè)定結(jié)果假性升高。

schiff堿是HbA1c形成過(guò)程的中間體，也稱(chēng)"HbA1c前體"或"不穩(wěn)定的HbA1c"，主要干擾基于糖化與非糖化血紅蛋白所帶電荷不同原理的離子交換色譜法，可參照廠家操作說(shuō)明自動(dòng)或手工去除schiff堿的干擾。目前許多全自動(dòng)的測(cè)定方法已經(jīng)在很大程度上消除了schiff堿的干擾，但個(gè)別樣品的干擾依然存在，會(huì)使測(cè)定結(jié)果假性升高，離子交換HPLC法亦包括在內(nèi)[15]，因此，應(yīng)仔細(xì)觀察測(cè)定結(jié)果圖譜。

不同分析系統(tǒng)干擾因素是不同的，相關(guān)醫(yī)務(wù)工作者應(yīng)知曉所用分析系統(tǒng)可能存在的干擾因素，如：HbE和HbD對(duì)一些離子交換HPLC法有干擾，但對(duì)免疫法沒(méi)有干擾；HbS和HbC會(huì)干擾一些免疫法和個(gè)別離子交換HPLC法建議3相關(guān)醫(yī)務(wù)工作者應(yīng)知曉HbA1c測(cè)定存在的干擾因素。

建議4有些干擾是非方法學(xué)特異的，某些患者人群不適宜采用HbA1c反映體內(nèi)血糖水平。

建議5有些干擾是方法學(xué)特異的，某些特殊患者人群可以選擇某種特定的HbA1c測(cè)定方法。

二、HbA1c分析方法的選擇

（一）分析方法概述

1．方法的定義：

對(duì)于臨床檢驗(yàn)，方法指的是分析系統(tǒng)。分析系統(tǒng)定義為：適合對(duì)某檢驗(yàn)項(xiàng)目在規(guī)定濃度范圍內(nèi)給出分析結(jié)果的一組按規(guī)定條件使用的儀器和裝置，包括試劑和物品。方法（分析系統(tǒng)）主要由按規(guī)定條件使用的儀器、試劑和校準(zhǔn)物組成。

2．HbA1c測(cè)定方法：

目前臨床實(shí)驗(yàn)室普遍采用的HbA1c測(cè)定方法有多種，按原理可分為兩大類(lèi)：一類(lèi)是基于糖化與非糖化血紅蛋白所帶電荷不同，如離子交換層析法，電泳法；另一類(lèi)是基于糖化與非糖化血紅蛋白的結(jié)構(gòu)不同，如免疫法、親和層析法及酶法等。不同方法采用的原理不同，所測(cè)組分不同，如：離子交換色譜法測(cè)定HbA1c，親和層析法測(cè)定總糖化血紅蛋白等，但由于國(guó)際臨床化學(xué)與醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室聯(lián)盟（InternationalFederationofClinicalChemistryandLaboratoryMedicine，IFCC）及"美國(guó)國(guó)家糖化血紅蛋白標(biāo)準(zhǔn)化計(jì)劃"（NationalGlycohemoglobinStandardizationProgram，NGSP）的標(biāo)準(zhǔn)化工作，糖化血紅蛋白的測(cè)定方法均應(yīng)以"HbA1c"或相當(dāng)于"HbA1c"報(bào)告結(jié)果[16,17]。

（二）方法的選擇

HbA1c的測(cè)定方法很多，有專(zhuān)用HbA1c分析儀，也有全自動(dòng)生化、免疫分析儀。20世紀(jì)90年代，由于兩項(xiàng)大型多中心研究––糖尿病控制與并發(fā)癥試驗(yàn)（DiabetesControlandComplicationTrial，DCCT）及英國(guó)前瞻性糖尿病研究（UnitedKingdomProspectiveDiabetesStudy，UKPDS）具有里程碑意義的臨床研究結(jié)論的發(fā)布[18,19,20]，增加了臨床對(duì)HbA1c應(yīng)用的需求，因此，催生了HbA1c的標(biāo)準(zhǔn)化工作[21]。

對(duì)HbA1c標(biāo)準(zhǔn)化工作起關(guān)鍵作用的是美國(guó)NGSP，HbA1c檢測(cè)的標(biāo)準(zhǔn)化使得全球大多數(shù)國(guó)家、地區(qū)的HbA1c測(cè)定結(jié)果具有可比性。NGSP的突出貢獻(xiàn)是對(duì)廠商方法的認(rèn)證，認(rèn)證主要包括對(duì)方法精密度、準(zhǔn)確度的評(píng)價(jià)。只有得到認(rèn)證的方法才能銷(xiāo)售、使用。這一舉措從源頭上標(biāo)準(zhǔn)化了HbA1c檢測(cè)，使得出廠方法結(jié)果都能夠溯源到DCCT/UKPDS。NGSP還通過(guò)不斷提高認(rèn)證標(biāo)準(zhǔn)，提高了檢測(cè)儀器出廠方法的質(zhì)量。

目前大多數(shù)即時(shí)檢測(cè)（point-of-caretesting，POCT）方法檢測(cè)HbA1c的精密性、準(zhǔn)確性無(wú)法滿足臨床需求[26,27]，不能用于糖尿病診斷[28]，但可以用作監(jiān)測(cè)，美國(guó)糖尿病學(xué)會(huì)（ADA）在2014年初更新的《糖尿病診療規(guī)程》中明確：POCT可以提供及時(shí)更改治療方案的機(jī)會(huì)[29]。

建議6應(yīng)選用測(cè)定結(jié)果可溯源至IFCC參考方法的分析系統(tǒng)，如：獲得NGSP認(rèn)證。

建議7廠商應(yīng)提供可溯源至IFCC參考方法的相關(guān)證明。

建議8多數(shù)POCT方法的精準(zhǔn)性不能滿足臨床需求，目前不能用于糖尿病診斷，但可用作監(jiān)測(cè)。

（三）分析系統(tǒng)性能指標(biāo)

HbA1c的測(cè)定是源于臨床需要，作為評(píng)價(jià)體內(nèi)糖基化狀態(tài)的有效指標(biāo)，HbA1c不僅用來(lái)評(píng)估糖尿病患者血糖控制的是否理想，HbA1c還用來(lái)確定個(gè)體化治療的控制目標(biāo)，因此，HbA1c測(cè)定的精準(zhǔn)性理應(yīng)滿足臨床需求。那么，究竟怎樣的HbA1c測(cè)定質(zhì)量才能滿足臨床需求？關(guān)于此問(wèn)題目前的共識(shí)是[30]：0.5%HbA1c的改變就是有臨床意義的改變[31]，這就要求實(shí)驗(yàn)室測(cè)定HbA1c的偏差<0.5%HbA1c，與滿足此要求相對(duì)應(yīng)的就是要求檢測(cè)方法的室內(nèi)不精密度（變異系數(shù)）應(yīng)≤2.0%，從而達(dá)到滿足室間變異系數(shù)<3.5%，才能控制測(cè)定結(jié)果偏差<0.5%HbA1c，達(dá)到臨床需要的測(cè)定質(zhì)量目標(biāo)，目前許多國(guó)際通用測(cè)定方法的室內(nèi)變異系數(shù)可以控制在2.0％以下[22,32]。

建議9以"HbA1c"或相當(dāng)于"HbA1c"報(bào)告結(jié)果。

建議10室內(nèi)變異系數(shù)應(yīng)小于3.0%，以小于2.0％為宜。

建議11與可接受參考值的差值應(yīng)在&plusmn;0.5%HbA1c范圍內(nèi)，以控制在±0.3%HbA1c范圍內(nèi)為宜。

（四）測(cè)定質(zhì)量

在糖尿病患者的長(zhǎng)期血糖監(jiān)測(cè)治療中，如患者更換就診醫(yī)院或臨床實(shí)驗(yàn)室，可能會(huì)導(dǎo)致HbA1c的檢測(cè)方法改變。使用不同廠商、不同方法、不同試劑檢測(cè)同一患者的HbA1c水平時(shí)，其結(jié)果可能出現(xiàn)差異，但不能相差太大，可接受的差異應(yīng)控制在±0.5%HbA1c范圍內(nèi)。原因是由于目前HbA1c測(cè)定在國(guó)際上已經(jīng)實(shí)現(xiàn)了標(biāo)準(zhǔn)化，采用不同廠商、不同方法、不同試劑測(cè)定同1份樣本的結(jié)果應(yīng)該是可比的[21]。

（五）HbA1c測(cè)定參考系統(tǒng)

IFCC也對(duì)HbA1c標(biāo)準(zhǔn)化工作有重要作用，建立了特異測(cè)定HbA1c的參考方法，使得全球HbA1c測(cè)定結(jié)果從無(wú)溯源性到有溯源性。

1．參考方法：

國(guó)際公認(rèn)測(cè)定HbA1c的參考方法為IFCC推薦的HPLC串聯(lián)電噴霧電離一級(jí)質(zhì)譜或HPLC串聯(lián)毛細(xì)管電泳，兩種方法結(jié)果一致。測(cè)定方法主要分為三步：首先制備溶血液；然后采用蛋白內(nèi)切酶Glu-C將溶血液酶解消化，得到糖基化和非糖基化的β鏈N末端六肽（HbA1c六肽、HbA0六肽）；最后采用HPLC串聯(lián)電噴霧電離一級(jí)質(zhì)譜或HPLC串聯(lián)毛細(xì)管電泳對(duì)HbA1c六肽和HbA0六肽進(jìn)行定量分析。以標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)IRMM/IFCC-466HbA1c和IRMM/IFCC-467HbA0的混合物作為校準(zhǔn)品，同步進(jìn)行酶解、分析，得到標(biāo)準(zhǔn)曲線，根據(jù)HbA1c六肽、HbA0六肽的峰面積比計(jì)算得出HbA1c的量。

2．HbA1c測(cè)定指定比對(duì)方法（designatedcomparisonmethod，DCM）：

美國(guó)HbA1c標(biāo)準(zhǔn)化計(jì)劃使用離子交換HPLC為"參考方法"，目前為HbA1c測(cè)定的指定比對(duì)方法，方法原理主要基于HbA1c與其他組分所帶的電荷不同，分別洗脫檢出，由于受技術(shù)條件的限制，不能特異測(cè)定HbA1c，有其他組分被當(dāng)做HbA1c同時(shí)檢出，因此，測(cè)定結(jié)果高于IFCC結(jié)果。IFCC參考實(shí)驗(yàn)室及NGSP參考實(shí)驗(yàn)室經(jīng)過(guò)幾年的比對(duì)，得出結(jié)論：NGSP測(cè)定結(jié)果與IFCC測(cè)定結(jié)果之間存在非常確定的相關(guān)性，可用回歸方程表示為：NGSP-HbA1c=0.0915×（IFCC-HbA1c）+2.15%（r2=0.998），因此，現(xiàn)行的NGSP結(jié)果可以溯源到IFCC參考系統(tǒng)，即可以溯源到溯源鏈的最高等級(jí)國(guó)際單位（SI單位）制。

另外還有2個(gè)HbA1c測(cè)定的指定比對(duì)方法，一個(gè)為日本的KO500方法，另一個(gè)為瑞典的MonoS方法。三個(gè)指定比對(duì)方法測(cè)定結(jié)果與IFCC測(cè)定結(jié)果之間存在非常確定的相關(guān)性，皆可用回歸方程表示，方法特異性從高到低的順序依次為：IFCC方法、瑞典方法、日本方法、美國(guó)方法，因此，測(cè)定結(jié)果從高到低的順序依次為：美國(guó)結(jié)果、日本結(jié)果、瑞典結(jié)果、IFCC結(jié)果，如：美國(guó)NGSP的7%HbA1c相當(dāng)于IFCC的53mmol/mol，日本的6.6%HbA1c，瑞典的6.1%HbA1c，不難看出，在指定比對(duì)方法中瑞典方法特異性最好。

3．標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)：

HbA1c有國(guó)際基準(zhǔn)標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)（primaryreferencematerial），為人血基質(zhì)的IRMM/IFCC-466HbA1c（認(rèn)證值：934mmol/mol，不確定度：22mmol/mol）及IRMM/IFCC-467HbA0（認(rèn)證值>976mmol/mol），由比利時(shí)的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)及測(cè)量研究所研制，二個(gè)標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)以一定的比例混合為HbA1c測(cè)定的參考方法校準(zhǔn)。

4．IFCC參考系統(tǒng)在HbA1c標(biāo)準(zhǔn)化中的地位及應(yīng)用：

IFCC參考系統(tǒng)是HbA1c測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)化唯一有效的參考系統(tǒng)。廠商出廠方法應(yīng)提供可溯源到IFCC參考方法的相關(guān)證明。

5．參考系統(tǒng)的應(yīng)用方式及范圍：

參考系統(tǒng)的應(yīng)用方式包括應(yīng)用參考物質(zhì)或參考方法，主要有：（1）分析系統(tǒng)的溯源和量值傳遞；（2）試劑的制備及質(zhì)量評(píng)價(jià)；（3）校準(zhǔn)物的制備、定值及質(zhì)量評(píng)價(jià)；（4）新常規(guī)方法的發(fā)展及評(píng)價(jià)；（5）室間質(zhì)量評(píng)價(jià)計(jì)劃中的靶值確定；（6）協(xié)作研究中分析的質(zhì)量保證。

三、方法的使用

（一）分析系統(tǒng)分類(lèi)及驗(yàn)證

臨床檢驗(yàn)中的分析系統(tǒng)可分為3類(lèi)。

1．封閉系統(tǒng)：

儀器、試劑和校準(zhǔn)物來(lái)自于同一廠商。

2．開(kāi)放系統(tǒng)：

試劑和校準(zhǔn)物來(lái)自同一廠商，儀器另選。

3．組合系統(tǒng)：

儀器、試劑和校準(zhǔn)物分別來(lái)自不同廠商，由實(shí)驗(yàn)室自己組合。

實(shí)驗(yàn)室在準(zhǔn)備使用一個(gè)新的分析系統(tǒng)（或新儀器、新試劑）測(cè)定臨床樣本前，應(yīng)對(duì)系統(tǒng)性能進(jìn)行驗(yàn)證，本共識(shí)中的驗(yàn)證主要是指新的分析系統(tǒng)在本實(shí)驗(yàn)室的性能是否與規(guī)定性能指標(biāo)或廠商提供的性能指標(biāo)一致。

建議12使用經(jīng)過(guò)認(rèn)證的分析系統(tǒng)，如廠商給出的性能指標(biāo)符合二、（三）要求時(shí)，只驗(yàn)證準(zhǔn)確度即可，不符合二、（三）要求時(shí)，應(yīng)對(duì)系統(tǒng)性能進(jìn)行驗(yàn)證。

建議13使用未經(jīng)認(rèn)證的分析系統(tǒng)，應(yīng)對(duì)分析系統(tǒng)性能進(jìn)行充分驗(yàn)證，性能指標(biāo)除二、（三）要求外，還應(yīng)包括干擾因素、可報(bào)告范圍等。

建議14不宜使用組合系統(tǒng)。

（二）準(zhǔn)確度、精密度實(shí)驗(yàn)方法

1．準(zhǔn)確度驗(yàn)證方法，包括但不限于以下方式：

（1）參加室間質(zhì)量評(píng)價(jià)（能力驗(yàn)證）活動(dòng)；（2）采用適當(dāng)?shù)挠凶C標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)（certifiedreferencematerial，CRM）；（3）與運(yùn)行經(jīng)過(guò)認(rèn)證分析系統(tǒng)的有資質(zhì)實(shí)驗(yàn)室的測(cè)定結(jié)果進(jìn)行比對(duì)。值得注意的是，只有無(wú)法得到驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)方法的其他替代材料或過(guò)程時(shí)，才能使用廠商產(chǎn)品校準(zhǔn)物或準(zhǔn)確度控制物。

2．精密度實(shí)驗(yàn)方法：

分別采用不少于2個(gè)水平的質(zhì)控物（高、低值）或患者樣品（盡量在醫(yī)學(xué)決定水平），每天測(cè)定2次（2次時(shí)間間隔不少于2h），每次重復(fù)測(cè)2個(gè)結(jié)果，測(cè)定20個(gè)工作日，以20個(gè)工作日的80個(gè)結(jié)果計(jì)算平均值、標(biāo)準(zhǔn)差及變異系數(shù)。此實(shí)驗(yàn)方法主要是針對(duì)未經(jīng)認(rèn)證的封閉系統(tǒng)、開(kāi)放系統(tǒng)以及廠商給出的性能指標(biāo)不符合本共識(shí)要求的分析系統(tǒng)。臨床檢驗(yàn)中，精密度常用不精密度表達(dá)，不精密度由變異系數(shù)評(píng)估，變異系數(shù)越小，精密度越好，反之，變異系數(shù)越大，精密度越差。

精密度是決定準(zhǔn)確度的先決條件，準(zhǔn)確度建立在精密度基礎(chǔ)上。因此，精密度實(shí)驗(yàn)應(yīng)慎重，采用的時(shí)間長(zhǎng)度很重要，只有在相對(duì)較長(zhǎng)的時(shí)間內(nèi)，一些因素[如：不同批號(hào)試劑、校準(zhǔn)物、色譜柱（適用時(shí)）、不同校準(zhǔn)頻率、不同操作人員、不同分析儀狀況、不同環(huán)境條件等]對(duì)測(cè)定結(jié)果的影響才能體現(xiàn)，才可以客觀反映實(shí)際情況，而實(shí)驗(yàn)結(jié)果的有效性及可靠性也隨時(shí)間的延長(zhǎng)而增加。

（三）校準(zhǔn)物和質(zhì)控物

可使用凍干或冰凍校準(zhǔn)物，校準(zhǔn)物復(fù)溶或融化后應(yīng)平衡至室溫并充分混勻后再使用，不可反復(fù)凍融。

可選用凍干或冰凍全血質(zhì)控物，質(zhì)控物復(fù)溶或融化后應(yīng)平衡至室溫并充分混勻后再進(jìn)行測(cè)定，不可反復(fù)凍融。自制新鮮冰凍全血質(zhì)控物是HbA1c測(cè)定的良好質(zhì)控物，如自制質(zhì)控物應(yīng)認(rèn)真選擇原料和工藝，原料應(yīng)為足夠量的混合新鮮全血，采用凍存管分裝，并對(duì)均勻性進(jìn)行考察評(píng)價(jià)，評(píng)價(jià)所用儀器應(yīng)具有良好的精密度，儲(chǔ)存于-70℃或更低溫度，可以穩(wěn)定1年以上。

建議15校準(zhǔn)物在所選用的儀器、試劑條件下應(yīng)使樣品測(cè)定結(jié)果能溯源至IFCC參考方法。

建議16質(zhì)控物應(yīng)有良好的長(zhǎng)期穩(wěn)定性，穩(wěn)定性宜在1年以上，凍干粉質(zhì)控物在更換試劑或色譜柱時(shí)可能會(huì)有基質(zhì)效應(yīng)，程度取決于所用方法。

建議17可以是已知值質(zhì)控物，也可以是未知值質(zhì)控物，至少2個(gè)不同水平（高、低值）。

建議18實(shí)驗(yàn)室應(yīng)知曉本室所用色譜柱可檢測(cè)樣品的數(shù)量，達(dá)到檢測(cè)數(shù)量限應(yīng)及時(shí)更換，不可超量使用。

（四）色譜（層析）柱

對(duì)于使用色譜柱的方法，不同方法的色譜柱可檢測(cè)樣品數(shù)量不同。

（五）樣本采集、處理和儲(chǔ)存

HbA1c存在于人體紅細(xì)胞的整個(gè)壽命過(guò)程中，紅細(xì)胞的壽命一般為120d左右，在紅細(xì)胞凋亡前，血液中HbA1c含量也會(huì)保持相對(duì)恒定。因此，HbA1c水平反映的是在檢測(cè)前120d內(nèi)的平均血糖水平，而與抽血時(shí)間、患者是否空腹、是否使用胰島素等因素?zé)o關(guān)[33]。樣本采集應(yīng)按照適用于臨床實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)的常規(guī)方法采集靜脈血，也可采指末端毛細(xì)血管血。一般采用含有乙二胺四乙酸（EDTA）鹽抗凝劑的采血管，或根據(jù)廠家要求使用采血管。

實(shí)驗(yàn)室有責(zé)任按照廠商方法的要求給臨床提供清晰、準(zhǔn)確的樣本采集指導(dǎo)。應(yīng)有樣本采集、類(lèi)型、運(yùn)送、接收（拒收）和儲(chǔ)存的具體要求并記錄，任何對(duì)樣本的不當(dāng)處理，如置于高溫環(huán)境，可引入大量未知干擾，干擾程度取決于所用方法[34,35]。

建議19檢測(cè)樣本不受飲食和采血時(shí)間的影響。

建議20不同測(cè)定方法的樣本穩(wěn)定性是不同的。

建議21一般情況下，全血樣本在4℃儲(chǔ)存，可以穩(wěn)定1周。在-70℃或更低溫度可以長(zhǎng)期儲(chǔ)存，至少穩(wěn)定1年以上，但不宜在-20℃長(zhǎng)期儲(chǔ)存。

（六）測(cè)定

1．安全措施：

血液樣本及來(lái)源于血液的校準(zhǔn)物、質(zhì)控物有可能含有致病微生物，應(yīng)避免入口或與皮膚接觸，在使用后應(yīng)按國(guó)家規(guī)定的具有危害性的生物品處理。

2．測(cè)定程序：

實(shí)驗(yàn)室應(yīng)制定合理的操作規(guī)范（標(biāo)準(zhǔn)操作程序），內(nèi)容至少包括：項(xiàng)目名稱(chēng)、方法學(xué)原理、樣本（采血管/抗凝劑、儲(chǔ)存）、校準(zhǔn)程序（校準(zhǔn)日期間隔、校準(zhǔn)方、校準(zhǔn)方法）、室內(nèi)質(zhì)量控制程序、樣本的測(cè)定程序、干擾因素、參考區(qū)間（參考范圍）、試劑、色譜柱（可測(cè)定樣品數(shù)量，適用于使用色譜柱的方法）、維護(hù)程序等。

建議22實(shí)驗(yàn)室應(yīng)制定合理的標(biāo)準(zhǔn)操作程序。

建議23所用試劑、耗材應(yīng)按規(guī)定存放，并在有效期內(nèi)使用。

建議24所用色譜柱達(dá)到檢測(cè)數(shù)量限應(yīng)及時(shí)更換（適用于使用色譜柱的方法）。

建議25所用儀器應(yīng)定期維護(hù)、保養(yǎng)。

（七）結(jié)果報(bào)告

1．單位：

目前，關(guān)于HbA1c的結(jié)果報(bào)告在國(guó)際上已經(jīng)達(dá)成共識(shí)，應(yīng)以IFCC的國(guó)際單位制（mmol/mol）以及衍生的NGSP傳統(tǒng)單位（%HbA1c）共同報(bào)告[22]。NGSP單位與IFCC單位換算的回歸方程為：HbA1c（NGSP）=0.0915×HbA1c（IFCC）+2.15%（適用范圍為：4%HbA1c～12%HbA1c）[36]。

2．參考區(qū)間：

HbA1c源于DCCT/UKPDS的參考區(qū)間為4%HbA1c～6%HbA1c（20~42mmol/mol），實(shí)驗(yàn)室應(yīng)對(duì)此參考區(qū)間進(jìn)行驗(yàn)證，如不適用，應(yīng)建立適用于自己實(shí)驗(yàn)室的參考范圍，并在報(bào)告中注明。

實(shí)驗(yàn)室應(yīng)盡量避免更換HbA1c的測(cè)定方法，如需改變，應(yīng)告知臨床醫(yī)師。

（八）異常結(jié)果的處理

在HbA1c的結(jié)果解釋及報(bào)告過(guò)程中，應(yīng)提倡實(shí)驗(yàn)室與臨床之間的積極溝通。以綜合考量、分析對(duì)測(cè)定結(jié)果可能的干擾，為臨床糖尿病診療提供可靠的依據(jù)[37]。

建議26以NGSP的傳統(tǒng)單位%HbA1c報(bào)告糖化血紅蛋白測(cè)定結(jié)果，并同時(shí)報(bào)告IFCC的國(guó)際單位制（mmol/mol）結(jié)果。

建議27以%HbA1c為單位的結(jié)果小數(shù)點(diǎn)后保留1位小數(shù)。

建議28如臨床需要，應(yīng)提供方法學(xué)名稱(chēng)。

建議29對(duì)于測(cè)定結(jié)果低于參考區(qū)間下限或高于15%HbA1c（140mmol/mol）的樣本應(yīng)進(jìn)行復(fù)查，并與臨床醫(yī)師溝通。

建議30對(duì)測(cè)定結(jié)果與臨床表現(xiàn)不符的樣本應(yīng)進(jìn)一步檢測(cè)。

四、測(cè)定質(zhì)量的監(jiān)測(cè)和保證

測(cè)定結(jié)果質(zhì)量監(jiān)測(cè)包括室內(nèi)質(zhì)量控制與室間質(zhì)量評(píng)價(jià)。

（一）室內(nèi)質(zhì)量控制

應(yīng)進(jìn)行室內(nèi)質(zhì)控物的測(cè)定，室內(nèi)質(zhì)控物是室內(nèi)精密度的良好監(jiān)測(cè)工具，是分析系統(tǒng)是否穩(wěn)定、測(cè)定質(zhì)量是否足夠可靠、報(bào)告能否發(fā)出的判定依據(jù)?？梢员ＷCHbA1c測(cè)定結(jié)果的穩(wěn)定性有利于依據(jù)HbA1c水平對(duì)患者疾病進(jìn)行的監(jiān)測(cè)。

質(zhì)控物測(cè)定值應(yīng)在控制限以?xún)?nèi)，否則不能測(cè)定患者樣本及發(fā)出結(jié)果報(bào)告，應(yīng)分析、查找失控原因，直到查明原因并糾正失控，才能測(cè)定樣本并發(fā)出結(jié)果報(bào)告[38,39]。

建議31每個(gè)測(cè)定日的開(kāi)始和結(jié)束都應(yīng)做質(zhì)控物分析。

建議32應(yīng)同時(shí)測(cè)定至少2個(gè)不同水平（高、低值）的質(zhì)控物。

建議33在同一個(gè)工作日內(nèi)，每出現(xiàn)下列情況之一：質(zhì)控值超出控制限、更換新的試劑、進(jìn)行新的校準(zhǔn)、更換儀器設(shè)備的關(guān)鍵配件、按規(guī)定進(jìn)行儀器特別保養(yǎng)后，應(yīng)重新測(cè)定質(zhì)控物。

（二）室間質(zhì)量評(píng)價(jià)（能力驗(yàn)證）

應(yīng)參加室間質(zhì)量評(píng)價(jià)（能力驗(yàn)證）活動(dòng)，室間質(zhì)量評(píng)價(jià)是目前驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)室測(cè)定結(jié)果可靠性、可比性并提高測(cè)定質(zhì)量的有效手段，也是標(biāo)準(zhǔn)化工作的主要體現(xiàn)方式。室間質(zhì)評(píng)所用樣品應(yīng)盡可能與臨床樣本相近，樣本濃度也應(yīng)當(dāng)接近醫(yī)學(xué)決定水平，這對(duì)于HbA1c用于無(wú)癥狀人群的篩查、血糖管理治療方案的制定及判斷療效非常重要。

建議34室間質(zhì)量評(píng)價(jià)樣品應(yīng)與臨床樣本同樣對(duì)待。

建議35室間質(zhì)量評(píng)價(jià)所用樣品應(yīng)盡可能與臨床樣本相近。

（三）測(cè)定質(zhì)量的保證

1個(gè)檢驗(yàn)指標(biāo)在臨床的應(yīng)用程度與其測(cè)定質(zhì)量密切相關(guān)，只有持續(xù)、全面的努力，才能不斷提高HbA1c測(cè)定質(zhì)量，才能為臨床糖尿病管理提供更可靠的依據(jù)。保證HbA1c測(cè)定結(jié)果質(zhì)量應(yīng)注重以下四個(gè)環(huán)節(jié)。