西達本胺是我國具有自主知識產權和全新化學結構的選擇性組蛋白去乙酰化酶抑制劑,具有高抗癌活性和低毒性。姜黃素是一種從東印度植物姜黃的根莖中分離出的天然黃色顏料,在很多腫瘤細胞系和動物模型中可抑制細胞生長和誘導凋亡。谷曉廣等研究了西達本胺聯(lián)合姜黃素對人皮膚T細胞淋巴瘤細胞(CTCL)系Hut78的增殖抑制和凋亡誘導作用,探討西達本胺聯(lián)合姜黃素治療CTCL的機制。
方法
分別用不同濃度西達本胺,10μmol/L姜黃素,1.2μmol/L西達本胺聯(lián)合10μmol/L姜黃素處理Hut78細胞24、48、72h后,采用MTS法檢測Hut78細胞的生存率。用0.6、1.2μmol/L西達本胺,10μmol/L姜黃素,1.2μmol/L西達本胺聯(lián)合10μmol/L姜黃素分別處理Hut78細胞24h,用流式細胞儀檢測細胞凋亡情況及細胞周期,用實時PCR和Western印跡法檢測凋亡相關基因Fas、caspase8、NF-κBp65及細胞周期相關基因P21、CDK2、細胞周期蛋白E(cyclinE)mRNA和蛋白的表達。
結果
西達本胺能明顯抑制Hut78細胞的增殖,且呈劑量依賴性(P<0.001)和時間依賴性(P<0.001)。培養(yǎng)48h和72h時,1.2μmol/L西達本胺聯(lián)合10μmol/L姜黃素對細胞增殖的抑制作用顯著強于1.2μmol/L西達本胺及10μmol/L姜黃素(均P<0.001)。流式細胞儀結果顯示,聯(lián)合組的凋亡細胞比例均顯著高于0.6、1.2μmol/L西達本胺組和10μmol/L姜黃素組(均P<0.001)。此外,聯(lián)合組和1.2μmol/L西達本胺組G0/G1期細胞比例明顯高于0.6μmol/L西達本胺組和10μmol/L姜黃素組,而其S期細胞比例及G2/M期細胞比例均明顯低于0.6μmol/L西達本胺組和10μmol/L姜黃素組(均P<0.05),聯(lián)合組與1.2μmol/L西達本胺組各細胞周期比例差異均無統(tǒng)計學意義(均P>0.05)。實時PCR結果顯示,聯(lián)合組和1.2μmol/L西達本胺組Fas、caspase8、P21mRNA的表達均明顯高于0.6μmol/L西達本胺組和10μmol/L姜黃素組(均P<0.001),而其NF-κBp65、CDK2、cyclinEmRNA的表達均明顯低于0.6μmol/L西達本胺組和10μmol/L姜黃素組(均P<0.001)。聯(lián)合組FasmRNA的表達明顯高于1.2μmol/L西達本胺組(P<0.001),而caspase8、P21、NF-κBp65、CDK2、cyclinEmRNA的表達與1.2μmol/L西達本胺組差異無統(tǒng)計學意義(均P>0.05)。Western印跡結果顯示,聯(lián)合組與0.6、1.2μmol/L西達本胺、不加藥物的對照組比較,F(xiàn)as、caspase8、P21蛋白的表達明顯增加,而NF-κBp65、CDK2、CyclinE蛋白的表達明顯降低,與以上基因mRNA的表達一致。
結論
西達本胺通過抑制細胞增殖和促進細胞凋亡來抑制CTCL細胞系Hut78生長,聯(lián)合姜黃素能明顯提高這種抑制作用。