摘要目的赤芍、甘草等中藥合劑(簡稱抗敏口服液)治療急性蕁麻疹的機理。方法①動物實驗：肥大細胞脫顆粒實驗，被動皮膚過敏實驗；②實驗室檢測：雙抗體夾心ELISA法檢測急性蕁麻疹患者治療前后IL－2、IL－4水平。結(jié)果抗敏口服液組肥大細胞脫顆粒百分數(shù)及吸光度值明顯低于其它各組藥物（P＜0.01），抗敏口服液可使急性蕁麻疹患者體內(nèi)升高的IL－4及降低的IL－2恢復(fù)到正常。結(jié)論抗敏口服液可穩(wěn)定肥大細胞膜、抑制抗原抗體結(jié)合、調(diào)整IL－2和IL－4濃度，對急性蕁麻疹有較好的治療效果。

        我們在臨床上用赤芍、甘草等中藥合劑(簡稱抗敏口服液)治療急性蕁麻疹患者，取得了較好療效，為進一步研究其治療機理，我們作了一系列動物實驗和臨床試驗，現(xiàn)將結(jié)果報道如下。材料和方法（一）實驗材料：抗敏口服液由四川泰華制藥有限公司提供，批號980901。由赤芍、甘草等中藥組成。赤芍、地龍、甘草、赤芍＋甘草、赤芍＋甘草＋地龍各100mL，相當于生藥220g，由瀘州醫(yī)學院藥劑科提供。實驗動物：Wistar大白鼠150只，雌雄各半，體重(200±20)g，一級標準，四川省醫(yī)學實驗動物合格證編號：醫(yī)動字24101116，瀘州醫(yī)學院動物飼養(yǎng)科提供。實驗期間全部動物飼以標準顆粒飼料，飲用自來水。臨床試驗對象：急性蕁麻疹患者為1998年10月至1999年3月我科住院患者，其中患者組20例，男8例，女12例，年齡12～72歲，平均年齡（39.2±2.7）歲，病期1～6d，平均2.6d，所有患者在采樣前3d均停止或不用抗組胺藥及免疫抑制劑，采樣前1周未用過皮質(zhì)類固醇等。正常人對照組20例，均為體檢正常人，性別與治療組相同，年齡相差不超過3歲。實驗試劑及儀器設(shè)備：Hanks液，pH為7.2，EDTA的質(zhì)量濃度為0.5g/L，天花粉為致敏原，溶劑為市售質(zhì)量分數(shù)為4％～5％氫氧化鋁凝膠，臨時用5mg天花粉溶于1mL氫氧化鋁凝膠溶解。L2T2臺式電動離心機（上海八二二廠產(chǎn)），TG328A型光學讀取分析天平（清華天平儀器廠生產(chǎn)）；T21型分光光度計（四川分析儀器廠產(chǎn)）。（二）實驗方法：1.肥大細胞脫顆粒實驗：取上述未用藥大白鼠6只，斷頭取血并收集血清。隨機將大白鼠分為抗敏組、赤芍組、地龍組、甘草組、赤芍＋甘草組、赤芍＋甘草＋地龍組、空白組。每組10只，按5mL/kg，每日1次于晨8時灌胃，分別于第6、7、8、9、10天每組各取2只，腹腔按10mL/kg注射上述天花粉氫氧化鋁凝膠，20min后，右腹腔內(nèi)注射上述Hanks液（注射前加熱）15～20mL，輕揉腹部2min后，脫頸椎處死大鼠，打開腹腔，用毛細吸管收集腹腔液（富含肥大細胞）于離心管中，2000r/min離心15min，棄上清液用含大白鼠血清的Hanks液洗滌1次，離心棄上清液，加入含25％大白鼠血清的Hanks液洗滌1次，離心棄上清液，加入含25％大白鼠血清的Hanks液1mL混勻，制成肥大細胞懸液觀察。取制備的肥大細胞懸液1滴于載玻片上，蓋上涂有中性紅染液的蓋片，在高倍顯微鏡下觀察，正常肥大細胞為正圓形，邊緣整齊；脫顆粒的肥大細胞邊緣不整齊或細胞破裂，有顆粒自細胞漿溢出，隨機計數(shù)100個細胞，計數(shù)脫顆粒細胞數(shù)及脫顆粒百分數(shù)。電鏡觀察，取大白鼠的小腸系膜，用2.5％戊二醛預(yù)固定2h，磷酸鹽緩沖液漂洗3次，1％四氧化二鋨固定1h，丙酮梯度脫水。Epon－618環(huán)氧樹脂包埋，超薄切片機切片，JEOL－10ESX透射電鏡觀察，加速電壓80kV，放大倍數(shù)8000倍。2.被動皮膚過敏反應(yīng)試驗：抗血清的制備：取4只未用藥（200±30）g大白鼠，將上述天花粉氫氧化鋁凝膠混懸液腳掌注射，每個腳掌注射0.1mL，每只大白鼠0.4mL，15d后，斷頭取血離心得抗血清。將上述取得的抗血清稀釋10倍。另取上述用藥各組大白鼠8只，剪去背部的毛，選2點，每點皮內(nèi)注射上述抗血清0.1mL，48h后進行抗原攻擊，尾靜脈注射天花粉10mg/kg，天花粉用1％伊文思藍溶液配成1mg/kg。20min后斷頭處死動物，翻轉(zhuǎn)背部皮膚，將藍色反應(yīng)斑皮片剪下，剪碎加入丙酮－生理鹽水（7∶3）混合溶液6mL浸泡，次日過濾并離心，在波長610nm處測吸光度A值。3.實驗室檢測：急性蕁麻疹患者口服抗敏口服液10mL，日3次，共治療7d。于治療前后各取患者血清，采用雙抗體夾心ELISA法檢測IL－2及IL－4，ELISA藥盒購自深圳晶美生物有限公司。首先分別將標準品IL－2稀釋為1000、500、250、125、62.5、0pg/mL，IL－4稀釋為375、187.5、93.75、46.88、23.44、0pg/mL，分別將稀釋后的標準品及標本加入已用抗體IL－2，IL－4單抗預(yù)包被的聚苯乙烯反應(yīng)小孔內(nèi)，每孔100μL，用封板膠紙封住反應(yīng)孔，37℃，90min，用PBS洗5次，每孔加生物素標記二抗100μL，封住板孔，37℃，60min。PBS洗板5次，再加稀釋好的酶聯(lián)物100μL，封住板孔，37℃，30min。PBS洗板5次，每孔加底物A、B各50μL，或1滴，避光37℃，15min。每孔加終止液50μL或1滴混勻，即刻用Bio－Rad公司生產(chǎn)的酶標儀在波長450nm處測其吸光度A值，用直線回歸分析，求出其標準方程，計算待檢血清中IL－2、IL－4的含量，單位為pg/mL。結(jié)果一、肥大細胞脫顆粒實驗1.各組肥大細胞脫顆粒百分數(shù)：從表1可見，抗敏組的肥大細胞脫顆粒百分數(shù)與其它各組相比最小，空白組與其它各組相比最大，其它各組也較高，各組與抗敏組比較，差異均有顯著性（P＜0.01），說明抗敏口服液可以有效抑制肥大細胞脫顆粒。2.被動皮膚過敏實驗：抗敏組的A值最小為0.08±0.04，顯著低于赤芍組(0.32±0.09)、地龍組(0.21±0.14)、甘草組(0.25±0.16)、赤芍＋甘草組(0.24±0.02)、赤芍＋甘草＋地龍組(0.28±0.08)及空白組(0.48±0.06),經(jīng)t檢驗，P均＜0.01。二、臨床試驗檢測結(jié)果見表2。治療前，蕁麻疹患者與健康人比較IL－2明顯降低，IL－4明顯升高，P均＜0.01。經(jīng)抗敏口服液治療后蕁麻疹患者IL－2、IL－4趨于正常，與正常人比較，P＞0.05。治療前后比較，差異均有顯著性(P＜0.05)。表1藥物對肥大細胞脫顆粒數(shù)的影響組別喂藥天數(shù)q值P值6d7d8d9d10d抗每組2219141111--赤芍組80887170723.67＜0.01地龍組86838079724.55＜0.01甘草組76747176713.93＜0.01赤芍+甘草組72707070673.11＜0.01赤芍+甘草+地龍組51545950361.04＜0.01空白組88759191935.43＜0.01表2急性蕁麻疹患者用抗敏2口服液治療前后IL-2、IL-4水平比較例數(shù)IL-2IL-4急性蕁麻診組20治療前173.3±49.798.8±13.0治療后519±14.232.7±8.9正常人20520±14934.3±8.6討論從肥大細胞實驗中，我們可以發(fā)現(xiàn)抗敏口服液對肥大細胞脫顆粒有明顯的抑制作用。被動皮膚過敏反應(yīng)實驗提示，抗敏口服液無論與其拆方或空白組相比，其對抗原抗體的結(jié)合都有明顯抑制作用。因此，其具有明顯的抗Ⅰ型變態(tài)反應(yīng)的作用，并且隨著時間的延長，作用加強。實驗室檢測方面：檢測結(jié)果發(fā)現(xiàn)蕁麻疹患者IL－4含量顯著高于正常對照組，經(jīng)抗敏口服液治療后IL－4含量明顯下降，而與正常人組比較，差異無顯著性，說明抗敏口服液可能是通過降低IL－4來治療蕁麻疹患者。IL－2系T淋巴細胞活化過程中由細胞膜所分泌的一種糖蛋白，具有促進T細胞、B細胞、NK細胞增生、分化、增強效應(yīng)，細胞活化，誘導(dǎo)干擾素產(chǎn)生及免疫調(diào)節(jié)等多種功能。同時也是T細胞活化標志之一。BenSasson[1]等認為T淋巴細胞產(chǎn)生IL－4需要IL－2，IL－2可上調(diào)IL－4誘導(dǎo)IgE合成。但相反的報道[2]認為IL－2能抑制正常人和過敏患者外周血單一核細胞，由IL－4誘導(dǎo)IgE合成。我們的研究表明蕁麻疹患者發(fā)作期血清IL－2水平顯著低于正常人對照組（P＜0.01）。蕁麻疹患者由于IL－2水平下降，使IL－2對IL－4促進B細胞合成IgE的抑制作用被減弱，使IgE合成增強。經(jīng)抗敏口服液治療后蕁麻疹患者IL－2趨于正常，治療前后比較，差異有顯著性，治療后與正常人比較差異無顯著性（P＞0.05），說明抗敏口服液的治療機理之一是升高IL－2。這也解釋了臨床上服抗敏口服液患者一般情況改善，抵抗力增加的問題。

        我們在臨床上應(yīng)用抗敏口服液治療急性蕁麻疹，取得了較好療效。為進一步探討其治療機理，我們做了細胞因子的實驗。通過以上分析，我們可以得知，抗敏口服液可以通過調(diào)整細胞因子來治療蕁麻疹，這為治療過敏性疾病提供了一條有效的途徑。

（實習編輯：黃俊達）